重组人uPA17-KPI大规模发酵及纯化工艺的建立

摘要：

目的 建立重组人uPA17-KPI(rhuPA17-KPI)毕赤酵母工程菌在80 L发酵罐中的大规模发酵及纯化工艺.方法 对工程菌表达rhuPA17-KPI的pH值进行优化.在摇瓶中制备rhuPA17-KPI工程菌种子2 L,接种至80L发酵罐中,采用优化的pH值,补料分批培养方式对工程菌进行高密度发酵,控制和优化各种发酵条件,经甲醇诱导48 h后结束发酵.将发酵液离心,经SP Sepharose XL阳离子交换层析和SourceTM 30 RPC反相疏水柱层析纯化.结果 建立的发酵工艺为:控制发酵温度为28℃,pH 值为5.5,溶氧值为25%～30%之间,在酵母细胞湿重达到190 g/L时开始甲醇诱导表达,诱导30 h,rhuPA17-KPI的分泌达高峰,为300 mg/L发酵液.发酵上清经阳离子交换层析和反相疏水层析纯化后,获得纯度为95%以上的rhuPA17-KPI,产量为180 mg/L,回收率为60%.结论 已建立了rhuPA17-KPI毕赤酵母工程菌在80 L发酵罐中的大规模发酵及纯化工艺,为其产业化及临床应用奠定了基础.

关键词：重组人uPA17-KPI、毕赤酵母、发酵、纯化

所属期刊栏目：23

分类号：Q78(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家高技术研究发展计划863计划2006AA020905

在线出版日期：2010-12-16（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：1095-1098