采用卡介苗结核蜡酸合酶启动子构建分枝杆菌穿梭表达质粒

摘要：

目的 采用卡介苗(BCG)结核蜡酸合酶(Mycocerosic acid synthase,Mas)启动子,将分枝杆菌穿梭质粒pJEM11改建为分枝杆菌穿梭表达质粒.方法 PCR扩增BCG基因组中Mas启动子,定向克隆至质粒pJEM11的Apa Ⅰ与SnaB Ⅰ位点之间,构建分枝杆菌穿梭表达质粒pJMas.将幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp,)UreB基因克隆至pJMas质粒,转化耻垢分枝杆菌(Mycobacteria smegmatis,M.smegmatis)mc2155,SDS-PAGE检测重组UreB蛋白在M.smegmatis mc2155中的表达,Western blot分析其反应原性.结果 克隆的Mas启动子序列与结核杆菌H37Rv株的Mas启动子序列(gi31619628)同源性达99%;重组穿梭表达质粒pJMas经PCR及双酶切鉴定证明构建正确;UreB基因在M.smegmatis mc2 155中成功表达,表达的蛋白可与Hp阳性病人血清发生特异性反应.结论 成功构建分枝杆菌穿梭表达质粒pJMas,为构建以耻垢分枝杆菌为载体的多价疫苗奠定了基础.

关键词：分枝杆菌、结核、耻垢、结核蜡酸合酶、启动子、基因表达

所属期刊栏目：23

分类号：Q78;R378.91(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家自然科学基金资助项目30371318;重庆市卫生局重点项目渝卫教[2007]1号文07-1-007

在线出版日期：2010-12-16（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：1043-1045,1054