抗人CD25人鼠嵌合抗体在CHO细胞中的稳定表达及初步鉴定

摘要：

目的 在CHO细胞中稳定表达抗人CD25人鼠嵌合抗体,并对抗体活性进行初步鉴定.方法 采用脂质体法将嵌合抗体真核表达质粒pOptiVEC-H和pcDNA3.3-L共转染CHO-DHFR-细胞,通过去除HT和在培养基中加入500 μg/ml的Geneticine进行阳性克隆的筛选,有限稀释法对阳性克隆进行亚克隆,通过在培养基中加入浓度逐步增加的MTX提高克隆的抗体表达量.采用流式细胞术(FCM)检测嵌合抗体的抗原结合活性及人抗体重链Fc段、轻链κ链;提取细胞基因组进行PCR鉴定;抗体经超滤浓缩后,采用蛋白G亲和纯化法进行纯化,并进行Western blot分析;体外连续培养细胞株2个月及冻存、复苏后,采用ELISA法检测抗体分泌的稳定性.结果 获得稳定分泌嵌合抗体的细胞株IC1,ELISA检测抗体表达量为103 ng/ml;PCR结果表明,表达的质粒已整合人细胞基因组中;FCM及Western blot结果显示,嵌合抗体含有人抗体重链Fc段及轻链κ链,且保留了鼠抗体V区的抗原结合特异性;经蛋白G亲和纯化后,获得抗体220 μg,纯度>97%;体外连续培养细胞株2个月及冻存、复苏后,抗体分泌保持稳定.结论 获得了稳定表达人CD25人鼠嵌合抗体的CHO细胞株,其具有鼠源抗体的抗原结合特异性及人抗体的恒定区.

关键词：CD25、嵌合抗体、CHO细胞、稳定表达

所属期刊栏目：23

分类号：Q78(基因工程（遗传工程）)

在线出版日期：2010-12-16（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：1033-1037