pH值和盐浓度对金属螯合亲和层析分离人胰高血糖素样肽-1融合蛋白的影响

摘要：

目的 探讨pH值和盐浓度对金属螯合亲和层析(Immobilized metal ion affinity chromatography,IMAC)分离含His-Tag标签的人胰高血糖素样肽-1(Glucagon-like peptide-1,GLP-1)融合蛋白的影响,并确定最佳洗脱条件.方法 在0.50 mol/L盐浓度条件下,分别取pH 6.0、7.0、7.8和9.0 4种缓冲液进行咪唑梯度洗脱;在合适的pH值条件下,分别取氯化钠浓度0.25、0.50和0.75 mol/L 3种缓冲液进行咪唑梯度洗脱.分析在不同pH值及盐浓度条件下洗脱融合蛋白所需要的咪唑浓度及回收率.结果 在所考察的pH值范围内,洗脱融合蛋白所需的咪唑浓度随洗脱液pH值的升高而逐渐降低,当洗脱液pH值为7.8时,融合蛋白的分离效果最佳,大部分杂蛋白被0～40 mmol/L咪唑洗脱液去除且不含融合蛋白,而绝大部分融合蛋白在咪唑浓度达80～200 mmol/L时被洗出,总叫收率达(83.7±1.0)%,且比例较高;在此pH值条件下,氯化钠浓度达0.75 tool/L,才会影响融合蛋白的回收率,氯化钠浓度为0.25或0.50 mol/L的洗脱液洗出融合蛋白的效果相近;在pH 7.8,含0.25 mol/L氯化钠的洗脱体系下,用50 mmol/L咪唑溶液洗脱杂蛋白,200 mmol/L咪畔溶液洗脱融合蚩白,融合蛋白的回收率和比例分别可达(85.2±2.0)%和(80.5±1.0)%.结论 在所考察的pH值和盐浓度范围内,提高洗脱液pH值和盐浓度均可降低洗脱融合蛋白需要的咪唑量,但也会降低融合蛋白的回收率.

关键词：人胰高血糖素样肽-1、融合蛋白质类、金属螯合亲和层析、氢离子浓度、盐浓度

所属期刊栏目：23

分类号：Q657.7(生物热学)

资助基金："重大新药创制"科技重大专项项目2009CX09102-253

在线出版日期：2010-11-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：999-1004