人溶菌酶基因在毕赤酵母中的表达及发酵条件的优化
目的 在毕赤酵母中表达人溶菌酶(Human lysozyme,hLY)基因,并对发酵条件进行优化.方法 将人工合成的hLY成熟肽基因克隆至表达载体pPIC9K中,电转化至毕赤酵母GS115,通过抗G418筛选获得高拷贝重组子GS115/hly,经甲醇低温诱导表达后,取发酵液上清进行SDS-PAGE分析及酶活性检测,并对培养基初始pH值、甲醇添加量、诱导温度和时间进行优化.结果 人工合成的hly测序结果与CenBank中报道的核酸序列完全一致;GS115/hly经PCR鉴定,hly基因已整合入GS115基因组内;经甲醇诱导表达的GS115/hly发酵液上清具有溶菌活性,活性达30 U/ml;经SDS-PAGE分析,在相对分子质量约15 200处可见目的 蛋白条带;GS115/hly的最佳诱导条件为:培养基初始pH 5.0,甲醇添加量2.0%,26℃诱导108 h.结论 在毕赤酵母CS115中表达了具有较高酶活性的hly,并对发酵条件进行了初步优化.
人溶菌酶、毕赤酵母、基因表达、抗菌活性
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Q786;Q55(基因工程（遗传工程）)
2010-11-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
953-956
