超声微泡联合pDsRed2-N1-CD/UPRT融合自杀基因治疗肺癌的机制
目的 研究超声微泡联合pDsRed2-N1-CD/UPRT融合自杀基因治疗肺癌的机制.方法 采用PCR法扩增大肠杆菌CD和UPRT基因,克隆入pDsRed2-N1载体.构建pDsRed2-N1-CD/UPRT质粒,转化感受态大肠杆菌BL21(DE3),挑取阳性菌,提取质粒,酶切及测序鉴定.将质粒与超声微泡融合,将混合物转染A549细胞,测定CD/UPRT基因的直接杀伤效应和旁效应;并检测不同强度的超声对超声微泡与质粒混合物中质粒结构、转染细胞形态及转染效率的影响.结果 pDsRed2-N1-CD/UPRT质粒经酶切及测序证明构建正确.荧光显微镜下可观察到质粒在超声微泡中的分布.转染A549细胞后,随着5-FU浓度的增加,细胞生长抑制率也增加,可高达58%;在相同剂量的5-FU作用下,增加转染细胞的比例,相应的细胞生长抑制率也随之增加,可高达78%.低能量的超声波对pDsRed2-N1-CD/UPRT质粒结构无明显改变,电泳条带变化不大,对转染细胞形态也无明显影响,超声介导基因转染率最高可达30%.结论 超声微泡能增强CD/UPRT基因对肿瘤细胞的直接杀伤和旁效应,起到治疗肿瘤的作用;低能量的超声微泡能提高CD/UPRT基因对细胞的转染效率,且不会损伤细胞及目的 基因的DNA.
超声微泡、自杀基因、胞嘧啶脱氰酶、尿嘧啶磷酸核糖转移酶、肺肿瘤
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Q789;R734.2(基因工程（遗传工程）)
重庆市卫生局项目CSTC2008BB5240
2010-11-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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