TRAIL114～281-IL-24融合蛋白的原核表达及其体外抗肿瘤细胞活性
目的 原核表达肿瘤坏死因子(Tumor necrosis factor,TNF)相关的凋亡诱导配体(TNF-related apoptosis inducing ligand,TRAIL)114～281肽和人白细胞介素-24(Interieukin-24,IL-24)融合蛋白,并检测其体外抗肿瘤细胞活性.方法 以人外周血单个核细胞总RNA为模板,PCR扩增TRAIL114～281和IL-24基因,经T4 DNA连接酶连接成融合基因,克隆至pET-28a载体中,构建重组原核表达质粒pET-28a/TRAIL114～281IL-24,转化大肠杆菌B121(DE3),IPTG诱导表达.表达的重组蛋白TI经层析法纯化后,进行Western blot分析.并采用MTT法检测其对肿瘤细胞增殖的影响,caspase 3活性检测试剂盒检测其对不同肿瘤细胞caspase 3活性的影响.结果 重组表达质粒经酶切鉴定及测序证明构建正确;TI融合蛋白以包涵体形式表达,表达量约占菌体总蛋白的30%;纯化的重组蛋白纯度可达95%,且可与鼠抗人IL-24抗体发生特异性反应;经复性的蛋白能明显抑制人宫颈癌上皮细胞HeLa和人乳腺癌细胞MCF-7增殖,并显著提高肿瘤细胞的caspase 3活性.结论 已在大肠杆菌中表达了TRAIL114～281IL-24融合蛋白,其具有诱导部分肿瘤细胞凋亡的活性.
TNF相关凋亡诱导配体、白细胞介素-24、重组融合蛋白质类、原核细胞、基因表达、肿瘤、细胞调亡、胱天蛋白酶3
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Q786;R73-36+2(基因工程（遗传工程）)
2010-11-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
913-917
