重组人源抗狂犬病病毒单克隆抗体的质控方法及质量标准的建立

摘要：

目的 建立重组人源抗狂犬病病毒单克隆抗体(rhRMcAb)的质控方法和质量标准.方法 采用小鼠中和试验(MNT)和快速荧光灶抑制试验(RFFIT)分别测定6批rhRMcAb样品的中和活性;还原、非还原SDS-PAGE检测rhRMcAb样品的纯度;还原烷基化胰蛋白酶酶切和反相高效液相色谱法分析rhRMcAb的肽图;焦谷氨酸肽酶去除N-端焦谷氨酸封闭后,氨基酸序列分析仪测定rhRMcAb的N-端氨基酸序列;表面等离子共振法(Surface plasmon resonance,SPR)测定rhRMcAb与狂犬病病毒糖蛋白的亲和常数;按<中国药典>三部(2005版)要求检测rhRMcAb的各项其他指标,并建立其质量标准.结果 采用MNT和RFFIT 2种方法检测6批rhRMcAb的中和活性,批间活性基本一致;3批rhRMcAb原液的还原SDS-PAGE纯度大于99.0%,非还原SDS-PAGE除抗体主带外,在高、低相对分子质量处分别存在一些次带;3批原液样品的肽图图谱与理化测定对照品一致;N-端氨基酸序列与理论序列一致;结合狂犬病病毒糖蛋白抗原的亲和常数为1.86×108/M;其他各项指标均符合<中国药典>三部(2005版)要求;建立的质量标准中,中和活性应不低于500 IU/mg,SDS-PAGE及HPLC纯度应不低于98.0%.结论 已建立了rhRMcAb的质控方法和质量标准,可用于rhRMcAb产品的检定.

关键词：重组人源单克隆抗体、狂犬病病毒、质量控制

所属期刊栏目：23

分类号：Q78(基因工程（遗传工程）)

资助基金："十一五"863计划生物和医药技术领域重大项目2006AA02A247

在线出版日期：2010-10-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：861-865