流感疫苗血凝素含量测定替代方法的建立及验证
目的 建立测定流感疫苗血凝素(Haemagglutinin,HA)含量的替代方法,并进行验证,以解决大流行流感发生初期疫苗原液中HA定量的难题.方法 优化糖苷酶处理条件,将流感疫苗原液经糖苷酶处理后,以还原SDS-PAGE方法分离样品,以灰度扫描法确定HA蛋白百分比,结合样品总蛋白数值,计算样品中HA含量.以该方法和传统的单向免疫扩散(SRID)法分别测定7批流感疫苗原液中HA含量,并进行比较.结果 优化的糖苷酶处理条件为:总蛋白400μg/ml,PNGase F加入比例为1:50.样品经糖苷酶处理后,以还原SDS-PAGE法可以清晰区分各蛋白条带,经测序后确定HA两个亚基,与预期相对分子质量一致.该方法测定7批流感疫苗原液中HA含量的结果与SRID法测定结果的符合率在87.90%~122.20%之间.结论 初步建立了测定流感疫苗中HA含量的替代方法,在WHO参考品供应不到位时,可用于大流感发生时疫苗原液中HA之定量.
流感疫苗、血凝素、糖蛋白类、流感病毒、聚丙烯酰胺凝胶电泳、免疫扩散
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R392-33
2010-09-30(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
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