基于529 bp高度重复序列的弓形虫PCR诊断方法的建立

摘要：

目的 建立基于529 bp高度重复序列的弓形虫PCR诊断方法.方法 以弓形虫基因组中529 bp的高度重复序列为诊断靶基因设计引物,并以其为模板经PCR扩增该基因,与pMD18-T载体连接,构建pMD18/Tox529 bp重组质粒,测序鉴定正确后,经稀释标定作为标准品.优化PCR反应体系及条件,并验证该方法的灵敏度及特异性.结果 所构建的pMD18/Tox529 bp重组质粒经测序正确,建立的PCR方法最低可检出10个拷贝的目的 基因.除对弓形虫基因组DNA扩增出特异性条带外,用该方法对健康志愿者全血、正常小鼠全血、间日疟原虫、恶性疟原虫及结核杆菌基因组DNA均未扩增出特异性条带.结论 已建立了一种具有较高灵敏度和特异性的弓形虫PCR诊断方法,有望应用于人和动物弓形虫感染的筛查、临床诊断及流行病学调查.

关键词：弓形虫病、重复序列、核酸、聚合酶链反应

所属期刊栏目：23

分类号：R382.5;Q78(医学寄生虫学)

资助基金：国家重点基础研究发展计划973计划资助2010CB530001

在线出版日期：2010-09-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：767-769