大肠杆菌色氨酸操纵子基因突变株的构建与表达

摘要：

目的 构建大肠杆菌色氨酸操纵子基因突变株.提高邻氨基苯甲酸合成酶和色氨酸合成酶的产量.方法 利用依赖于Opn I酶的PCR方法突变表达载体pET-22b(+)-Trp Operon上的关键位点,PCR扩增Trp OperonM基因,构建pET-22b (+)-Trp OperonM重组表达质粒,经酶切及测序鉴定正确后,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达.制备粗酶液,经比色法测定邻氨基苯甲酸合成酶和色氨酸合成酶的活性.结果 PCR扩增产物可见约7 000 bp的Trp OperoM条带;所构建的重组表达质粒经酶切及测序鉴定正确;邻氨基苯甲酸合成酶和色氨酸合成酶的活性比大肠杆菌BL21(DE3)空菌分别提高了4.5倍和5.2倍.结论 已成功构建了大肠杆菌色氨酸操纵子基因突变株BL21(DE3)/pET-22b(+)-Trp OperonM邻氨基苯甲酸合成酶和色氨酸合成酶的活性均有提高,为高产色氨酸基因工程菌的构建奠定了基础.

关键词：色氨酸、操纵子、突变、邻氨基苯甲酸合成酶、色氨酸合成酶

所属期刊栏目：23

分类号：R378.2+1;Q789(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：潍坊医学院青年教师科研启动基金690822289

在线出版日期：2010-09-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：711-713