小鼠微RNA miR-21真核表达质粒的构建及其在小鼠肾小球系膜细胞中的表达

摘要：

目的 构建小鼠微RNA miR-21真核表达质粒,并在小鼠肾小球系膜细胞中表达.方法 人工合成小鼠miR-21基因序列,构建miR-21真核表达质粒pGenesil-miR-21.使用脂质体Lipofectamine 2000转染小鼠肾小球系膜细胞后,G418筛选,获得稳定转染克隆,提取总RNA,通过实时荧光定量RT-PCR技术检测miR-21的表达.结果 经酶切鉴定和测序证实,合成的miR-21基因序列完全正确,并已成功克隆到真核表达质粒pGenesil-1上.重组真核表达质粒转染小鼠肾小球系膜细胞后,筛选出的阳性克隆可稳定高表达miR-21.结论 已成功构建miR-21真核表达质粒,并在小鼠肾小球系膜细胞中高效表达,为进一步探讨miR-21的生物学功能奠定了基础.

关键词：微RNA、miR-21、真核细胞、基因表达、肾小球系膜细胞

所属期刊栏目：23

分类号：R394.2;Q78

资助基金：国家自然科学基金30800534

在线出版日期：2010-09-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：708-710