重组小鼠白细胞介素-17F/His融合蛋白的原核表达、纯化及生物活性
目的 在大肠杆菌(E. coli)中表达并纯化重组小鼠白细胞介素-17F(rmIL-17F),并鉴定其生物活性.方法 经RT-PCR扩增rmIL-17f基因片段,定向插入原核表达载体pET28a,构建重组表达质粒pET28a/mIL-17f,转化E. coli BL21(DE3),经IPTG诱导表达,Ni2+-NTA亲和层析纯化rmIL-17F/His融合蛋白,Western blot鉴定其反应原性.以纯化复性的rmIL-17F滴鼻干预小鼠,采用实时荧光定量PCR法检测小鼠肺组织IL-6 mRNA的表达,ELISA法检测小鼠外周血IL-17F、IL-4和IFNγ的水平.结果 扩增的mIL-17f基因DNA序列与GenBank中登录的mIL-17f基因序列一致,所构建的重组表达质粒pET28a/mIL-17f构建正确;表达的重组蛋白相对分子质量约为19 000,主要以包涵体形式表达,表达量约占菌体总蛋白的30%;纯化的重组蛋白纯度约为95%,具有良好的反应原性,经黏膜给药后,可促进小鼠肺组织中IL-6 mRNA的表达,并提高小鼠血清中IL-4和IFNγ,的水平.结论 已成功地在大肠杆菌中高效表达并纯化了具有生物学活性的rmIL-17F,为进一步研究IL-17F的功能奠定了基础.
白细胞介素-17、原核细胞、基因表达、蛋白纯化、生物活性
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R979.5;Q789(药品)
上海市自然科学基金资助项目10ZR1423000
2010-09-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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