扩展青霉碱性脂肪酶结构基因的克隆与原核表达

摘要：

目的 克隆并原核表达扩展青霉碱性脂肪酶(PEL)结构基因.方法 提取扩展青霉总RNA,经RT-PCR扩增PEL结构基因,克隆至原核表达载体pET-28a(+),构建重组表达质粒pET-28a-PEL,转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达,SDS-PAGE分析目的蛋白的表达形式及表达量,包涵体蛋白经变性、复性后,采用NaOH滴定法测定其酶活性.结果 经RT-PCR扩增获得约780 bp的PEL结构基因;所构建的重组表达质粒pET-28a-PEL经酶切及PCR鉴定正确;目的蛋白的相对分子质量约为28 000,以包涵体形式表达,表达量约占菌体总蛋白的10%;发酵液及复性的包涵体蛋白酶活性可达12.44 U/ml.结论 已成功克隆并原核表达了PEL结构基因,为获得碱性脂肪酶高产基因工程菌株奠定了基础.

关键词：扩展青霉、碱性脂肪酶、结构基因、原核表达

所属期刊栏目：23

分类号：Q785;Q786(基因工程（遗传工程）)

资助基金：吉林省教育厅"十一五"科学技术研究项目吉教科合字[2008]第273号

在线出版日期：2010-07-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：485-488