B族链球菌C5a肽酶表位的预测、分段表达及其免疫原性
目的 应用牛物信息学方法预测B族链球菌C5a肽酶蛋白(sCPB)的表位,分段表达其中4个功能活性区域,并分析其免疫原性.方法 用预测程序ProPred和ANTIGENIC预测SCPB的表位;分别构建C5a肽酶4个目的片段的重组表达质粒.经酶切测序正确后,转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达,SDS-PAGE分析目的蛋白的表达形式及表达量;并经镍柱亲和层析纯化,纯化的重组蛋白进行蛋白质谱分析和Western blot分析后,皮下免疫小鼠.ELISA检测小鼠血清抗体水平.结果 经预测,SCPB含1个既可结合MHC又具有B细胞表位特征的肽段.构建的4个重组表达质粒经酶切及测序鉴定正确,目的蛋白主要以可溶性形式表达,表达量约占菌体总蛋白的30%～70%.纯化的重组蛋白纯度可达90%,质谱分析表明与SCPB的相似性很高;Western blot分析表明.可与兔抗全长SCPB多克隆抗体反应.重组F1、FE、Fn蛋白免疫小鼠血清抗体滴度较高,三者差异无统计学意义;F2a蛋白抗体滴度最低,与F1、FE和Fn蛋白差异有统计学意义.结论 已成功构建并高效表达了SCPB的4功能活性区域;Fn是重要的免疫优势表位功能区;本文为B族链球菌毒力机制的研究及亚单位蛋白疫苗的研制奠定了基础.
B族链球菌、C5a肽酶、表位、分段表达、免疫原性
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R378.1+2;Q789(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)
国家自然科学基金30371487
2010-07-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
460-465
