30 L生物反应器培养重组CHO细胞生产重组人组织型纤溶酶原激活剂
目的 应用30 L填充床生物反应器培养重组CHO细胞生产重组人组织型纤溶酶原激活剂(rht-PA).方法 将表达rht-PA的CHO细胞株用含10%胎牛血清的IMDM复苏并放大培养,接种至30 L生物反应器中,并采用Biocommand Plus 软件系统实时监控.先用含血清的培养基生长培养,再更换为无血清培养基进行表达培养.在整个培养过程中,采用灌流培养方式,每日采样测定培养上清中葡萄糖浓度,隔日测定rht-PA的表达水平及生物学活性.采用Lysine-Sepharose 4B和Zn~(2+)-Sepharose 4B两步亲和层析法纯化rht-PA,并检测纯化产物的比活、产率及纯度.结果 整个培养过程持续51 d,包括生长培养6 d,表达培养45 d,平均日灌流量为46.7 L,最高达60 L,共收获表达培养液约2 100 L;rht-PA的平均表达水平为15.15 mg/L,最高可达19.25 mg/L,生物学活性平均约为8 000 IU/ml;表达培养至第13天时,葡萄糖消耗量达最高水平(15.97 g/L·d);纯化的rht-PA比活达6×10~5 IU/mg,产率为63%,纯度达99%以上.结论 应用30 L填充床生物反应器可实现重组CHO细胞的长时间连续培养及产物rht-PA的高效表达.
人组织型纤溶酶原激活剂、重组CHO细胞、生物反应器、灌流培养
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Q813.1+1(生物工程学(生物技术))
2010-06-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
428-430
