羊布鲁菌膜蛋白的提取及血清抗体间接ELISA检测方法的建立

摘要：

目的 提取羊布鲁菌标准强毒株16 m膜蛋白,分析其反应原性,并建立血清抗体间接ELISA检测方法.方法 利用碳酸盐方法提取羊布鲁菌标准强毒株16 m膜蛋白,12%SDS-PAGE分析其相对分子质量范嗣;用自然感染羊布鲁菌的阳性血清进行Western blot分析,初步确定膜蛋白组分中能够发生免疫反应的条带;用方阵滴定法确定抗原和抗体的最佳稀释度,建立间接ELISA检测方法,并进行特异性和精密性验证;检测免疫豚鼠的血清抗体效价;对临床上采集的羊血清样品进行检测,并与虎红平板凝集试验结果进行比较.结果 分离的羊布鲁菌膜蛋白浓度为9.4 μg/μl;SDS-PAGE分析显示,羊布鲁菌膜蛋白的相对分子质量主要集中在17 000～80 000之间;Western blot分析显示多条特异性反应条带.膜蛋白抗原的最佳稀释度为1:1 280,抗体最佳稀释度为1:10.所建立的ELISA方法特异性和精密性良好.ELISA检测豚鼠血清效价为1:64 000.检测临床510份羊血清样品,阳性率为86.3%,高于虎红平板凝集试验检出的阳性率(41.2%).结论 已成功提取了羊布鲁菌膜蛋白,其具有良好的反应原性,并建立了血清抗体间接ELISA检测方法.

关键词：羊布鲁菌、膜蛋白、提取、反应原性、间接ELISA

所属期刊栏目：23

分类号：R378.5;R392-33(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：国家自然科学基金30972198/C180503

在线出版日期：2010-06-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：412-415