肠道病毒71型P1和3CD基因双顺反子重组腺病毒的构建及表达

摘要：

目的 构建肠道病毒71型(EV71)P1和3CD基因双顺反子重组腺病毒,并检测3CD蛋白酶的切割作用和表达产物的抗原性.方法 采用RT-PCR法从阜阳分离的EV71中扩增P1和3CD基因,构建穿梭质粒pShuttle-CMV-P1-3CD、pShuttle-CMV-P1和pShuttle-CMV-3CD;经同源重组获得重组腺病毒rAd-P1-3CD、rAd-P1和rAd-3CD,分别转染293细胞,RT-PCR法检测目的基因的转录,免疫荧光法检测目的蛋白的表达.结果 3种重组腺病毒经PCR和酶切鉴定表明构建正确;RT-PCR检测表明,3个重组腺病毒均已转录目的基因mRNA;免疫荧光检测仅观察到rAd-P1-3CD表达产物具有特异性,而rAd-P1、rAd-3CD未能检测到特异性表达产物.结论 已成功构建EV71 PI和3CD基因双顺反子重组腺病毒,表达产物具有EV71特异抗原性,提示P1产物只有在被3CD蛋白酶切割后才体现抗原性.

关键词：肠道病毒71型、PI基因、3CD基因、双顺反子、重组腺病毒

所属期刊栏目：23

分类号：Q75;R373.2(分子遗传学)

在线出版日期：2010-06-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：341-345