A群链球菌四价重组蛋白的表达、纯化及其免疫原性

摘要：

目的 原核表达并纯化A群链球菌M1、3、6、18型四价重组蛋白,并检测其免疫原性.方法 以克隆质粒pUC18-Strep4为模板,PCR法扩增四价重组蛋白基因,克隆至表达载体pQE30中,构建重组表达质粒,转化E. coli M15,筛选阳性克隆,IPTG诱导表达.采用Ni~(2+)-NTA凝胶亲和层析纯化重组蛋白.以该蛋白免疫家兔,ELISA法检测血清抗体滴度;间接免疫荧光法(IFA)检测A群链球菌型特异性抗体;体外杀菌试验检测杀菌抗体活性.结果 四价重组蛋白表达质粒pQE30-StreP4经双酶切和测序,证明构建正确.重组蛋白相对分子质量与预期相符,表达量约占菌体总蛋白的30%,为可溶性表达.纯化后蛋白纯度可达90%以上,并可诱导家兔产生高滴度的M1、3、6型特异性杀菌抗体.结论 已成功表达了A群链球菌四价重组蛋白,纯化后的蛋白可诱导家兔产生针对A群链球菌M1、3、6三个血清型菌株的特异性杀菌抗体.

关键词：A群链球菌、重组蛋白、原核表达、免疫原性

所属期刊栏目：23

分类号：R378.1~+2;QTS9(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

在线出版日期：2010-04-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：17-21