实时荧光定量PCR检测毕赤酵母基因组中外源基因拷贝数

摘要：

目的 建立实时荧光定量PCR检测毕赤酵母基因组中外源基因拷贝数的方法 .方法 采用双标准曲线法,分别利用含有GAP基因和绿色荧光蛋白(GFP))基因的质粒,进行实时荧光定量PCR反应,建立标准曲线.将含有外源GFP基因的毕赤酵母基因组进行实时荧光定量PCR,通过标准曲线计算出外源GFP基因在毕赤酵母基因组中的拷贝数.结果 毕赤酵母GAP基因Ct值与起始拷贝数对数的回归方程为:Y=-3.612x+39.28,GFP基因Ct值与起始拷贝数对数的回归方程为:Y=-3.544x+37.99,GAP基因和GFP基因的反应效率分别为0.89和0.90,两条标准曲线的相关系数均为0.999,且均有良好的重复性.检测10个转入GFP基因的毕赤酵母菌株,筛选到9个单拷贝整合GFP基因的菌株和1个多拷贝整合GFP基因的菌株.结论 已建立了检测毕赤酵母基因组中外源基因拷贝数的实时荧光定量PCR法,该方法 能够筛选出不同外源基凶拷贝数的毕赤酵母菌株.

关键词：实时荧光定量PCR、毕赤酵母、基因拷贝数

所属期刊栏目：22

分类号：Q789(基因工程（遗传工程）)

在线出版日期：2010-03-19（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：1236-1239,1243