人Bid蛋白的原核表达及纯化
目的 克隆人Bid基因,原核表达并纯化目的 蛋白.方法 用PCR方法 从HeLa细胞cDNA文库中扩增人Bid基因,克隆至pGEX-6P-1表达载体,构建重组表达质粒pGEX-6P-1-Bid,转化大肠杆菌BL21(DE3).IPTG诱导表达.表达产物经GST亲和层析纯化.结果 PCR扩增得到588 bp的DNA片段.重组表达质粒pGEX-6P-1-Bid经双酶切鉴定和测序表明构建正确.表达的目的 蛋白相对分子质量约48 000,表达量约占菌体总蛋白的50%,纯化后纯度可达97%.结论 已成功克隆并原核表达了人Bid基因,得到纯度较高的Bid蛋白.为进一步研究其结构和功能奠定了基础.
Bid基因、克隆、原核表达、纯化
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Q78(基因工程(遗传工程))
国家自然科学基金30770477;90813003
2010-03-19(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
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