抗人类共激活蛋白单克隆抗体的制备

摘要：

目的 制备抗人类共激活蛋白(CLP)单克隆抗体,并进行纯化.方法 配制2×DMEM培养基,与等量的2.2%甲基纤维素溶液混合,加入HAT、胎牛血清等,配成半固体HAT选择性细胞培养基.用基因重组人CLP抗原免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞,与小鼠骨髓瘤NS-2细胞融合后,直接在半固体培养基上克隆化培养,筛选可持续、稳定、高效分泌抗CLP单克隆抗体的杂交瘤细胞株.对分泌的单抗进行鉴定后,制备小鼠腹水,经DEAE离子交换柱纯化,半饱和硫酸铵沉淀,G25凝胶过滤除盐.结果 共筛选出14株分泌抗CLP单抗的杂交瘤细胞,其培养上清可与相对分子质量约16 000的CLP抗原结合,抗体类型为鼠IgGa1型.多数克隆分泌的抗体相对亲和力大于1∶20 000,14株克隆分泌的单抗分别对应3个抗原结合位点.纯化后的单抗纯度接近95%.结论 已成功制备并纯化了抗人CLP单克隆抗体,为建立CLP免疫学检测方法奠定了基础.

关键词：类共激活蛋白、单克隆抗体、克隆化培养

所属期刊栏目：22

分类号：Q812(生物工程学(生物技术))

在线出版日期：2009-10-19（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：799-803