RNA干扰SW480细胞HIF-1α双向凝胶电泳中横向拖尾的消除及条件的优化

摘要：

目的 建立RNA干扰结肠癌SW480细胞系,并对缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)双向凝胶电泳中的多个关键步骤进行优化,以消除横向拖尾.方法 以携带针对HIF-1α两条干扰片段的pGenesil-11质粒转染SW480细胞,沉默HIF-1α.对双向凝胶电泳中样品裂解液、样品的处理方式、上样量及电泳条件等进行优化.结果 转染第7天RNA干扰效果最好.RNA干扰后,SW480细胞蛋白用含有硫脲的裂解液B进行提取,以样品制备疗法A进行处理后,上样200 μg蛋自,延长除盐时间,聚焦50 000伏小时,得到的双向凝胶电泳图基本没有横向拖尾,分离蛋白点1 288±15.结论 已成功建立了RNA干扰结肠癌SW480细胞系;优化的双向凝胶电泳可有效消除横向拖尾,为进一步分析、鉴定和寻找与疾病相关的蛋白质奠定了基础.

关键词：RNA干扰、结肠癌、蛋白质组学、双向凝胶电泳、横向拖尾

所属期刊栏目：22

分类号：R-33;Q813(医学研究方法)

在线出版日期：2009-10-19（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：748-752