Serratia marcescens非特异性核酸内切酶的原核表达及其应用

摘要：

目的 在大肠杆菌中表达Serratia marcescens非特异性核酸内切酶(SMNE),并进行纯化、活性检测及应用.方法 合成smne基因,应用PCR技术在基因的5'端引入6个组氨酸标签序列,将其插入分泌表达载体pET-20b(+)中,转化大肠杆菌BL221(DE3)pLysS,IPTG诱导表达.表达产物经镍离子螯合琼脂糖凝胶一步纯化后,检测其活性并计算比活.将纯化的SMNE用于重组腺病毒的制备,对外源性核酸进行降解,并采用Southem blot对外源性DNA残留量进行测定.结果 重组表达质粒pET-20b-smne经PCR、双酶切和测序证明构建正确.重组蛋白的表达量为8.0 mg/L,纯化后纯度达95%,比活达1.1×106 U/mg.在重组腺病毒制备过程中使用后,成品中的外源性DNA残留量≤10 ng/5.0×1011VP.结论 已成功地在大肠杆菌中表达了SMNE,纯化的SMNE活性高,有望应用于重组生物制品制备过程中外源性核酸的去除.

关键词：Serratia marcescens、非特异性核酸内切酶、原核表达、外源性DNA

所属期刊栏目：22

分类号：Q814(生物工程学(生物技术))

资助基金：国家高技术研究发展计划863计划2007AA021202

在线出版日期：2009-08-19（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：667-670