MafA基因真核表达质粒的构建及其在人肝癌细胞HePG-2中的表达和作用
目的 构建胰岛素启动子肌腱膜的纤维肉瘤肿瘤基因同系物A(MafA)基因的真核表达质粒,并观察MafA基因在人肝癌细胞HePG-2中的表达及其作用,为糖尿病基因治疗的研究奠定基础.方法 提取小鼠胰腺组织总RNA,经RT-PCR扩增MafA基因片段,克隆至真核表达载体pEGFP-N2和pEGFP-C1中.用脂质体将重组表达质粒转染至人肝癌细胞HePG-2中,荧光显微镜观察绿色荧光蛋白的表达,RT-PCR检测转染细胞中MafA和insulinⅡ基因的转录水平,Western blot检测融合蛋白EGFP-MafA的表达.结果 重组表达质粒pEGFP-N2/MafA和pEGFP-C1/MafA经PCR、双酶切和测序证明构建正确;重组质粒转染的HePG-2细胞有绿色荧光蛋白表达;经RT-PCR可检测到MafA基因表达,但未检测到insulin Ⅱ基因表达;经Westernblot检测.在相对分子质昔约70 000处可见特异性反应条带.结论 已成功构建了MafA基因真核表达质粒pEGFP-N2/MafA和pEGFP-C1/MafA,以其转染的HePG-2细胞可表达MafA基因,并翻译成蛋白,但未表达insulin Ⅱ基因.
胰岛素启动子、肌腱膜的纤维肉瘤肿瘤基因同系物A、肝癌细胞、糖尿病、基因治疗
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R589.1(内分泌腺疾病及代谢病)
重庆市科委自然科学基金CSTC.2007BB5281
2009-08-19（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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659-662,666
