P53蛋白的原核表达及纯化

摘要：

目的 构建P53基因重组原核表达质粒,在大肠杆菌中表达融合蛋白并进行纯化.方法 以pBabe-P53R质粒为模板,PCR扩增P53基因全序列,克隆至pGEX-4T-1载体中,构建重组原核表达质粒pGEX-4T-1-P53,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达.表达产物经不同配比的去垢剂复性后,用Glutathione Sepharose 4Bgel亲和层析纯化.结果 重组原核表达质粒pGEX-4T-1-P53经双酶切鉴定,表明构建正确.表达的GST-P53融合蛋白相对分子质量约80 000,IPTG诱导时间以1 h为宜.1%Triton X-100和1 mmol/L EDTA为蛋白复性的最佳去垢剂.纯化的GST-P53融合蛋白可与羊抗人GST抗体和鼠抗人P53抗体发生特异性反应.500 ml菌液可获得1 mg纯化蛋白.结论 已成功构建了P53基因重组原核表达质粒,表达并纯化了GST-P53融合蛋白,为研究NIRF与P53基因之间的相互关系奠定了基础.

关键词：P53基因、原核表达、纯化、GST-pull down

所属期刊栏目：22

分类号：Q816(生物工程学(生物技术))

资助基金：国家自然科学基金30872248;重庆市自然科学基金CSTC;2008BB5400;重庆市科学技术研究项目KJ080326

在线出版日期：2009-07-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：563-566