人溶菌酶基因的原核表达及其生物学活性

摘要：

目的 在大肠杆菌中表达人溶菌酶(hLYZ)基因,并检测其生物学活性.方法 将人溶菌酶基因克隆至带有GST融合标签的原核表达载体pGEX-4T-1上,转化大肠杆菌BL21(DE3),终IPTG诱导表达.表达产物经亲和层析纯化后,进行Western blot鉴定,并用溶壁微球菌比浊法检测酶活性,热激法检测其生物学活性.结果 经PCR、双酶切鉴定和核苷酸序列测定,表明重组表达质粒pGEX-4T-hLYZ构建正确.SDS-PAGE显示,在相对分子质量约40 000处可见目的蛋白条带,表达量占菌体总蛋白的46.5%,目的蛋白在裂解沉淀中占17.0%,在裂解上清中占58.3%,主要以可溶形式表达.纯化后,重组蛋白纯度可达95%以上,且具有良好的反应原性.重组hLYZ酶活性为2 389 U/mg,对金黄葡萄球菌和大肠杆菌具有抑制作用.结论 已成功地在大肠杆菌中表达了可溶性重组人溶菌酶,且具有较高的生物学活性.

关键词：人溶菌酶、原核表达、生物学活性

所属期刊栏目：22

分类号：Q786(基因工程（遗传工程）)

资助基金：吉林省科技发展项目20070210

在线出版日期：2009-07-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：544-547