集成干扰素突变体的构建、表达及纯化

摘要：

目的 构建高效且可供单甲氧基聚乙二醇马来酰亚胺(mPEG-MAL)定点修饰的集成干扰素突变体(IIFNm108),并进行表达、纯化及鉴定.方法 采用同源序列对比、空间结构模拟并结合α干扰素与受体结合的特点设计突变位点.用重叠延伸PCR法,扩增IIFNm108基因,与pET-23b载体连接,构建重组表达质粒pET-23b-IIFNm108,转化E. coli BL21(DE3),IPTG诱导表达,所得包涵体经变性、复性、DEAE阴离子交换及凝胶过滤两步层析纯化后,进行各项鉴定.结果 重组表达质粒经双酶切及测序鉴定证明构建正确.目的 蛋白的表达量占菌体总蛋白的30%以上,主要以包涵体形式存在.纯化的IIFNm108蛋白纯度大于95%,比活性约为(2.08±0.17)×108 IU/mg,N-端、C-端氨基酸序列与理论一致,相对分子质量为19 500,可与mPEG-MAL成功交联.结论 已获得一种高效且可供mPEG-MAL定点修饰的集成干扰素突变体IIFNm108.

关键词：集成干扰素、突变体、聚乙二醇修饰、表达、纯化

所属期刊栏目：22

分类号：Q786;Q5(基因工程（遗传工程）)

资助基金：北京市科技计划项目D0205001040321

在线出版日期：2009-06-19（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：486-489