小鼠载脂蛋白A-Ⅰ的原核表达及抗血清的制备

摘要：

目的 原核表达小鼠载脂蛋白A-Ⅰ(ApoA-Ⅰ),并制备抗血清.方法 应用RT-PCR方法从小鼠肝脏中扩增ApoA-Ⅰ基因,亚克隆至原核表达载体pET-28a(+),转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达.表达的融合蛋白经Ni2+-NTA柱纯化后,免疫家兔,制备抗血清.结果 扩增的ApoA-Ⅰ基因经测序,表明与GenBank中报道的序列(NM_009692)完全相同.重组表达质粒经酶切鉴定,证明构建正确.表达的ApoA-Ⅰ融合蛋白相对分子质量约为32 000,表达量占菌体总蛋白的17%.纯化的融合蛋白纯度达90.7%,可与抗His·Tag单抗发生特异性反应.制备的抗血清可识别ApoA-Ⅰ融合蛋白,效价可达1:105.结论 已在大肠杆菌中表达了小鼠ApoA-Ⅰ,并制备了较高效价的抗血清.

关键词：载脂蛋白A-Ⅰ、原核表达、抗血清

所属期刊栏目：22

分类号：Q816;R392(生物工程学(生物技术))

在线出版日期：2009-06-19（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：470-473