大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位的原核表达及活性鉴定

摘要：

目的 克隆大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位(ltB)基因,构建其原核表达质粒,并对表达产物进行活性鉴定.方法 采用PCR技术从产毒大肠杆菌129株基因组DNA中扩增ltB基因,克隆入载体pET-32a(+)中,构建原核表达质粒pET-32a(+)-ltB,转化E. Coli BL21(DE3),IPTG诱导表达,Ni2+-NTA树脂层析柱进行纯化,纯化产物采用ELISA法鉴定其与牛GM1的结合活性.结果 重组表达质粒经菌落PCR鉴定证明构建正确,所克隆的ItB基因与GenBank中报道的相应核苷酸序列的同源性为99.9%.重组菌诱导4 h,目的 蛋白表达量最高,约占菌体总蛋白的25%.纯化的重组LTB蛋白纯度约为96%,具有与牛GM1特异性结合的生物学活性.结论 已成功克隆了ltB基因,并构建了其原核表达质粒,表达的重组蛋白具有一定的生物学活性.

关键词：大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位、原核表达、黏膜佐剂

所属期刊栏目：22

分类号：Q786;R378.21;R996(基因工程（遗传工程）)

资助基金：贵州省优秀科技教育人才省长专项基金200607

在线出版日期：2009-06-19（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：461-463