小鼠Chk1基因RNAi表达质粒的构建与筛选

摘要：

目的 构建并筛选小鼠细胞周期检测点激酶1(Chk1)基因的RNAi表达质粒,为肿瘤的基因治疗探索新途径.方法 根据GenBank中登录的Chk1基因序列及shRNA设计原则,设计、合成用于构建Chk1基因RNAi质粒的寡核苷酸,并构建4种重组Chk1 RNAi质粒,酶切及测序鉴定正确后,以脂质体LipofectamineTM 2000介导转染小鼠Lewis肺癌细胞株.转染后48 h,采用RT-PCR技术检测转染细胞中Chk1基因mRNA的转录水平,筛选有效的Chk1 RNAi质粒.结果 4种重组Chk1RNAi质粒经酶切鉴定及测序证明构建正确.转染后48 h,转染质粒pGPU6/GFP/Neo-Chk1-536的Lewis细胞Chk1基因mRNA的转录水平下降,以其作为后续实验的有效质粒.结论 已成功构建并筛选出Chk1基因的iRNA表达质粒,为Chk1基因iRNA治疗肿瘤的研究奠定了基础.

关键词：细胞周期检测点激酶1、RNA干扰、放疗、肿瘤、基因治疗

所属期刊栏目：22

分类号：Q782(基因工程（遗传工程）)

资助基金：吉林省科技发展计划项目;省科委白求恩专项基金200705224

在线出版日期：2009-05-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：359-362