X盒结合蛋白1-u的原核表达及纯化

摘要：

目的 构建X盒结合蛋白1-u(XBP1-u)基凶原核表达质粒,表达并纯化XBP1-U蛋白.方法 利用RT-PCR技术从肝癌细胞HepG2中扩增XBP1-U基因,先插入中间载体pGEM-T easy,再将其克隆至原核表达载体pET32a,构建重组原核表达质粒pET32a-XBP1-u,转化E coli BL21(DE3),IPTG诱导表达.表达产物经Ni-NTA树脂柱亲和层析纯化后,进行Western blot 鉴定.结果 测序分析证实,克隆入pET32a的XBP1-u序列与GenBank中登录的XBP1-u cDNA序列一致.IPTG的最佳诱导浓度为0.5mmol/L,最佳诱导时间为6 h.目的 蛋白以包涵体形式表达,相对分子质量约为33 000.纯化的蛋白经SDS-PAGE分析显示单一条带,且具有良好的反应原性.结论 已成功构建了XBP1-u基因原核表达质粒,表达并纯化了XBP1-u蛋白,为XBPI-u在肿瘤发病中的作用机制及在应激性疾病临床治疗中的研究奠定了基础.

关键词：X盒结合蛋白1-u、原核表达、纯化

所属期刊栏目：22

分类号：Q785;Q786(基因工程（遗传工程）)

资助基金：重庆市科委自然科学基金2007BB5280;重庆市教委科学基金KJ070314;重庆医科大学重点项目XBZD200803

在线出版日期：2009-05-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：323-326,330