人β-NGF蛋白的原核表达、纯化及其生物活性

摘要：

目的 在大肠杆菌中表达人神经生长因子β(β-NGF)蛋白,并进行纯化及生物活性检测.方法 以人外周血基因组DNA为模板,PCR扩增人β-NGF基因片段,克隆并测序后,与表达载体pET-28a(+)连接,构建重组表达质粒pET-28a-β-NGF,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达.采用分子筛层析法对表达产物进行纯化,复性后用鸡胚背根神经节培养试验检测其生物活性.结果 酶切和测序证实,PCR扩增的人β-NGF基因片段为β-NGF成熟肽编码序列;重组蛋白的表达量约占菌体总蛋白的23.5%,主要以包涵体形式表达,纯化后蛋门纯度达90%以上,表达量为4.8 mg/L菌液,且可明显促进鸡胚背根神经节神经突起生长.结论 已在大肠杆菌中成功表达了人β-NGF蛋白,纯化后的重组蛋白具有良好的生物活性.

关键词：人神经生长因子β、大肠杆菌、表达、纯化、生物活性

所属期刊栏目：22

分类号：Q786(基因工程（遗传工程）)

资助基金：吉林省科技发展计划20030406

在线出版日期：2009-05-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：238-241