人甲型流感病毒H1N1亚型NS1蛋白的原核表达及纯化
目的 表达并纯化人甲型流感病毒H1N1亚型NS1蛋白.方法 用RT-PCR法从人甲型流感病毒株A/PR/8/34(H1N1)中扩增NS1基因,克隆人原核表达载体pTXB1,构建重组原核表达质粒pTXB1/NS1,经酶切鉴定后,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,SDS-PAGE分析表达形式和表达量.经几丁质柱亲和层析纯化表达蛋白,串联飞行时间质谱仪检测其相对分子质量.结果 所构建的重组表达质粒pTXB1/NS1序列完整,插入的基因片段全长690 bp.以1.0 mmol/L IPTG37℃诱导4 h,重组蛋白表达量最高,占菌体总蛋白的50%以上.破菌上清及沉淀中均有目的蛋白表达.纯化的NS1蛋白纯度达95%以上,相对分子质量约为26 000.结论 已成功表达并纯化了人甲型流感病毒H1N1亚型NS1蛋白,为其进一步的研究奠定了基础.
人甲型流感病毒、H1N1亚型、NS1蛋白、原核表达、纯化
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Q786;R373.1+3(基因工程(遗传工程))
2009-05-08(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
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