小鼠MIF基因的原核表达及纯化

摘要：

目的 克隆小鼠巨噬细胞移动抑制因子(MIF)基因.在原核系统中表达并进行初步纯化,为研究MIF的功能奠定基础.方法 提取小鼠肺组织总RNA,采用RT-PCR技术扩增MIF基因,克隆入pMD18-T载体,酶切鉴定及测序后,再定向插入原核表达载体pET-28a(+)中,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达.表达产物经SDS-PAGE及Western blot鉴定后,进行纯化.结果 克隆得到的目的基因片段大小与预期相符,测序结果与GenBank中报道的序列完全一致.重组MIF蛋白相对分子质量约为15 000,以包涵体形式存在,表达量约占菌体总蛋白的40%,且具有良好的反应原性.经初步纯化后,纯度达95%以上.结论 已成功克隆了小鼠MIF基因,并在原核系统中表达了重组蛋白,纯化的蛋白纯度较高,可用于后续试验.

关键词：巨噬细胞移动抑制因子、原核表达、纯化

所属期刊栏目：22

分类号：R392.1;Q786

资助基金：国家重点基础研究发展规划973计划2005CB523005;国家科技支撑计划2006BAD06A01

在线出版日期：2009-04-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：132-135