双亚型(H3/H1)流感病毒血凝素基因真核表达质粒的构建及其在HeLa细胞中的表达

摘要：

目的 构建双亚型(H3/H1)流感病毒血凝素(HA)基因真核表达质粒,并在Hela细胞中进行表达.方法 通过PCR分别改造流感病毒H1亚型HA1和H3亚型HA基因片段.在融合片段间引入(C4S)3柔性linker和口蹄疫病毒2A蛋白1inker.采用DNAstar结合生物信息学软件Insight Ⅱ分析后,对其空间构象进行模拟.将H1HA1-H3HA融合基因片段克隆至真核表达载体pVAX1 CMV启动子下游.通过脂质体法转染HeLa细胞,RT-PCR法检测转染细胞中目的基因mRNA的转录,间接免疫荧光检测转染细胞中目的蛋白的表达.结果 表达双亚型(H3/H1)流感病毒血凝素基因的重组真核表达质粒pVAX1-H3HA-H1HA1经酶切和测序证明构建正确.转染重组质粒的HeLa细胞可检测到目的基因mRNA的转录和目的蛋白的表达.结论 已成功构建了真核表达质粒pVAX1-H3HA-H1HA1,并可在HeLa细胞中正确转录与表达,为H3、H1亚型流感病毒双价核酸疫苗的研究奠定了基础.

关键词：流感病毒、H3亚型、H1亚型、血凝素、真核表达、HeLa细胞

所属期刊栏目：22

分类号：R373.1+3;Q782(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：国家高技术研究发展计划863计划2006AA10A205;科技支撑项目2006BAD06A05

在线出版日期：2009-04-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：124-127