鼠源性抗EHEC O157:H7 Stx2噬菌体Fab抗体库的构建及筛选
目的 构建鼠源性抗EHEC O157:H7 Stx2噬菌体Fab抗体库,并从中筛选特异性的抗体.方法 用EHECO157:H7 Stx2类毒素免疫BALB/c小鼠.取脾分离淋巴细胞,提取总RNA,RT-PCR分别扩增抗体轻、重链(κ和Fd)基因,经双酶切依次克隆入噬粒载体pComb3X中,电转化大肠杆菌XL1-Blue,以辅助噬菌体M13K07进行超感染,构建抗EHEC O157:H7Six2的Fab噬菌体抗体库.以纯化的Stx2为抗原进行筛选,获得抗EHEC O157:H7 Stx2的特异性Fab抗体.Western blot法检测噬菌体抗体与毒素抗原的结合活性,并对所得阳性克隆进行基因序列分析.结果 构建了一个库容为1.56×107的Fab抗体库,筛选出 3株特异性较强的阳性克隆,其中2个可与Stx2A1亚单位抗原反应,1个可与Stx2B亚单位抗原反应.基因序列分析显示,轻、重链可变区氨基酸序列与GenBank中已注册的鼠免疫球蛋白可变区氨幕酸序列同源性分别为98.5%和99.6%.结论 已成功构建了鼠源性抗EHEC O157:H7 Stx2噬菌体Fab抗体库,为进一步制备抗EHEC O157:H7 Stx2的治疗性人源化抗体奠定了基础.
EHEC O157、H7、Stx2亚单位、噬菌体、Fab抗体库
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Q782;R392-33(基因工程（遗传工程）)
军队科技攻关项目06G078;国家高技术研究发展计划863计划2006AA02Z405
2009-04-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共5页
111-114,123
