幽门螺杆菌hp1188基因的克隆及高效表达

摘要：

目的 克隆并表达幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)hp1188基因,为研究幽门螺杆菌的黏附机制奠定基础.方法 用PCR法从H,pylori标准株NCTC 11637基因组DNA中扩增hp1188基因,克隆入原核表达载体pQE-30,构建重组原核表达质粒pQE30-hp1188,转化大肠杆菌DH5α,IPTG诱导表达.SDS-PAGE分析表达形式和表达量.表达蛋白经Ni2+-NTA树脂纯化,Western blot鉴定其反应原性.结果 所构建的重组表达质粒pQE30-hp1188序列完整,插入的基因片段全长810 bp,与GenBank中的hp1188基因同源性达98%.表达的重组蛋白相对分子质量约为30 600,以1.0 mmol/L IPTG诱导4 h,表达量最高,破菌上清和沉淀中均有表达,可溶性蛋白表达量占全菌总蛋白的47%.重组蛋白纯化后纯度可达90%,并可被H.pylori 患者血清识别.结论 已成功克隆了H. pylori hp1188基因,并在大肠杆菌DH5α中获得高效表达.

关键词：幽门螺杆菌、hp1188基因、克隆、表达

所属期刊栏目：22

分类号：R378;Q785;Q786(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：重庆市教委项目渝教科2003-7-3;重庆市科学技术委员会科技攻关项目CSTC;2005EA5020

在线出版日期：2009-03-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：18-21