人NIRF基因真核表达质粒的构建及其蛋白产物的生物信息学分析
目的 克隆人NIRF基因,构建其真核表达质粒.并运用生物信息学方法对NIRF蛋白进行分析.方法 应用RT-PCR技术,从HeLa细胞中扩增NIRF基因,插入到真核表达载体pcDNA3.1-Flag中,双酶切鉴定并测序.在NCBI蛋白质结构数据库中寻找与NIRF具有较高同源性的1WY8和1Z6U,并利用Insight Ⅱ结构生物信息学分析软件分析NIRF蛋白的结构和功能.结果 扩增出约2 400 bp的人NIRF全长cDNA;重组真核表达质粒pcDNA3.1-Flag-NIRF酶切后,可见约2 400 bp的目的 片段;测序结果表明NIRF全长cDNA与GenBank中NIRF序列完全一致.1WY8片段有3个赖氨酸残基,主要位于蛋白空间构象的表面;1Z6U片段含有Ring finger结构域,具有ligase活性.结论 已成功克隆了人NIRF基因全长cDNA,构建了其真核表达质粒,并利用生物信息学方法,初步分析了NIRF蛋白泛素化作用的机理.
NIRF基因、克隆、真核表达质粒、生物信息学
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Q784;R318.04(基因工程(遗传工程))
国家自然科学基金30872248;重庆市科技委员会资助项目CSTC;2008BB5400;重庆市教育委员会资助项目KJ080326
2009-03-27(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
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