HCV 2a J6JFH细胞感染模型的建立及初步应用

摘要：

目的 建立能够自主复制的丙型肝炎病毒(HCV)体外细胞感染模型.方法 制备HCV 2a FL-J6JFH和阴性对照FL-J6JFH(GND)RNA转录体.分别转染Huh-7.5细胞,荧光定量PCR(FQ-PCR)检测细胞内HCV RNA水平,免疫荧光法(IFA)检测细胞内HCV蛋白的表达.以转染细胞上清液感染Na(i)ve Huh-7.5细胞,检测HCV感染性病毒颗粒(HCVcc)的产生.将细胞用不同浓度的IFNα处理.观察所建立的细胞感染模型对IFNα的敏感性.结果 转染后第5天,FL-J6JFH转染细胞内HCV RNA为1.2×106 GE/μg RNA,第9天下降至最低水平,随后上升,于第13天达到最高值6.5×106 GE/μg RNA,此后直至第59天,均保持在106 GE/μg RNA左右,而FL-J6JFH(GND)转染细胞内HCV RNA则很快消失.FL-J6JFH转染的细胞内始终可以检测到HCV蛋白表达,而对照细胞内均未检测到.从第5天起,各时间点的FL-J6JFH转染细胞均能产生HCVcc.IFNα能够有效抑制HCVcc感染Huh-7.5细胞,并呈剂量依赖性.结论 已成功建立了能持续产生HCVcc的HCV 2a型体外细胞感染模型.IFNα能抑制FL-J6JFH HCVcc感染细胞中HCV RNA的复制,为研究HCV的结构与功能提供了实验平台.

关键词：丙型肝炎病毒、2a 基因型、J6JFH、细胞感染模型

所属期刊栏目：22

分类号：R512.6+3(传染病)

资助基金：国家自然科学基金30600529;30872247;军队专项课题06H021;06Z027;上海市重点学科建设项目B901

在线出版日期：2009-03-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：1-5,9