百日咳毒素S1亚单位截短片段的表达、纯化及初步应用

摘要：

目的 表达并纯化百日咳毒素(PT)S1亚单位截短片段S146,以其制备抗体,初步建市榆测PT的双抗体夹心ELISA法.方法 PCR扩增S146基因,亚克隆至载体pUC18,鉴定正确后,插入表达载体pET16b,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达.表达产物经SDS-PAGE和Western blot鉴定后,用镍离子亲和层析柱纯化,复性后的蛋白免疫家兔,制备抗血清,纯化后作为包被抗体,建立检测PT的双抗体夹心ELISA法,并检测其特异性.结果 表达的重组蛋白相对分子质量约为19 000,主要存在于破菌沉淀中,表达量占菌体总蛋白的44%;纯化后蛋白纯度为94.5%;家兔抗血清可特异性识别天然PTSI;建立的双抗体夹心ELISA法特异性良好.结论 已成功表达、纯化了PTS1亚单位截短片段S146,并以纯化的抗S146抗体作为包被抗体,初步建立了检测PT的双抗体夹心ELISA法,为研制特异性检测试剂和提供一种疫苗的质量控制方法奠定了基础.

关键词：百日咳毒素、S1亚单位、截短片段、克隆、表达、纯化、ELISA

所属期刊栏目：21

分类号：R378.4+2;Q789(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

在线出版日期：2009-03-10（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：1058-1061,1069