10.3969/j.issn.1004-5503.2008.12.004
以长链PCR为基础利用融合PCR扩增乙型脑炎病毒全长cDNA
目的 以长链PCR(Long-PCR)技术为基础,应用融合PCR方法扩增乙型脑炎病毒(JEV)全长基因组.方法 根据GenBank中收录的JEV全长基因组序列设计引物,分别扩增JEV SA14-14-2株的5'和3'半长分子,在5'端上游引物中引入T7启动子核心序列.利用细胞培养增殖病毒,提取病毒RNA,逆转录后采用Long PCR方法得到JEV的5'和3'两个半长分子,在此基础上进行融合PCR,得到JEV全长cDNA分子,克隆入pGEM T-easy载体,酶切鉴定并测序.结果 扩增出均6 000 bp的JEV的5'和3'两个半长分子及约11 000 bp的全长cDNA片段,其二级结构丰富的非编码区未发生缺失.JEV全长cDNA分子与GenBank中收录的相关毒株的的核苷酸序列同源性最高达99%,其氨基酸序列同源性最高达96.3%.其E蛋白基因与野毒株和减毒株进行比较,核苷酸序列同源性高达98%~99%,氨基酸序列也未出现较大差异.结论 已获得了乙型脑炎病毒SA14-14-2株全长基因组,为进一步构建感染性克隆奠定了基础.
乙型脑炎病毒、全长cDNA、长链PCR、融合PCR
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Q789;R373.3+1(基因工程(遗传工程))
2009-03-10(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
共5页
1047-1050,1053