Cyclin A-Cdk2对B细胞成熟因子的体外磷酸化作用

摘要：

目的 原核表达并纯化仅含BH3结构域的细胞凋亡调控蛋白BMF,并进行CyclinA-Cdk2特异性底物的体外磷酸化检测.方法 从HeLa细胞中扩增人源BMF基因,克隆至pGEX-6P-1表达载体,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,表达产物经Glutathione Sepharose 4B凝胶柱亲和层析纯化.以纯化的融合蛋白GST-BMF作为底物,免疫共沉淀得到的Cyclin A-Cdk2作为酶源,并以Cdk2的已知底物Histone H1作为阳性对照,进行体外磷酸化试验.结果 BMF基因的原核表达载体构建正确,表达的融合蛋白GST-BMF约占菌体总蛋白的40%,纯化后纯度约为90%.在体外磷酸化试验中,未出现与目的 蛋白GST-BMF相对分子质量相近的放射自显影带.结论 BMF蛋白在无细胞体系中不能被Cyclin A-Cdk2磷酸化.

关键词：凋亡、B细胞成熟因子、Cyclin A-Cdk2、体外磷酸化

所属期刊栏目：21

分类号：Q291

在线出版日期：2008-11-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：765-767