天蚕素A-蛙皮素杂合肽突变体的构建、表达及其抗菌活性

摘要：

目的 构建天蚕素A(1～8)-蛙皮素(1～12)杂合基因抗菌肽(CA-MA杂合肽)突变体,在大肠杆菌中融合表达,并进行抗菌活性检测.方法 采用PCR体外定点突变技术,设计1对方向相反的引物,其中1个引物引入突变点,应用高保真的Polybest DNA多聚酶进行重组表达质粒pGEX-4T-1-CA-MA的PCR扩增,使CA-MA杂合肽第16位密码子由AGT突变为TGG.将扩增片段自身连接,构建CA-MA杂合肽突变重组表达质粒pGEX-4T-1-W16-CA-MA,转化E. coli BL21,IPTG诱导表达突变体蛋白W16-CA-MA,并对表达产物进行纯化.分离GST融合蛋白后,进行抗菌活性检测.结果 重组突变表达质粒DNA测序结果表明,在预期位点发生了突变;突变蛋白在大肠杆菌中的表达量约占茵体总蛋白的18%;纯化后蛋白纯度可达75%以上,并具有一定的抗菌活性.结论 已成功获得了具有抗菌活性的杂合肽突变体W16-CA-MA.

关键词：天蚕素A-蛙皮素杂合肽、突变体、融合表达、抗菌活性

所属期刊栏目：21

分类号：Q784(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家"863"计划资助项目2006AA10A208-1-4

在线出版日期：2008-11-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：752-755