重组人抗乙型肝炎病毒表面抗体的筛选及序列分析

摘要：

目的 克隆、筛选人抗乙型肝炎病毒表面抗体(抗-HBs),并对其基因序列进行分析.方法 从抗-HBs抗体阳性血液中分离淋巴细胞,提取总RNA,合成cDNA,以此为模板,PCR扩增轻链和重链抗体可变区基因;应用已构建的抗体支架载体,构建重组表达载体,转化毕赤酵母X33,建立相应的酵母表达文库;甲醇诱导表达,Western blot及ELISA筛选抗-HBs抗体阳性菌株;PCR扩增DNA片段,进行测序及Blasm比对,并与已发表的抗-HBs抗体序列进行同源性分析.结果 重链及轻链抗体重组表达载体经双酶切鉴定,证明构建正确;经Western blot及ELISA筛选,获得了具有HBsAg结合活性的完整轻重链抗体;轻链可变区与已发表序列核苷酸同源性为93%,而氨基酸同源性仅为88%,尤其CDR3变异较大;重链可变区与已发表序列同源性较低,CDR3区基因长度及序列均有较大差别.结论 应用毕赤酵母表达体系筛选,获得了新的抗-HBs抗体.

关键词：抗乙型肝炎病毒表面抗体、重链、轻链、毕赤酵母、筛选、序列分析

所属期刊栏目：21

分类号：QTS4

资助基金：吉林省再生医学重点实验室资助项目200507

在线出版日期：2008-11-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：749-751