hTERT核心启动子调控HSV-TK自杀基因系统诱导肿瘤细胞的凋亡

摘要：

目的 观察人端粒酶催化亚单位(hTERT)启动子调控逆转录病毒介导的单纯疱疹病毒-胸苷激酶基因/丙氧鸟苷(HSV-TK/GCV)自杀基因系统诱导肿瘤细胞凋亡的效果.方法 采用PCR方法扩增胸苷激酶(TK)基因,并构建由hTERT核心启动子调控的胸苷激酶重组逆转录病毒载体pLNC-hTERTp-TK,转染包装细胞PT67,G418筛选阳性细胞克隆,检测病毒滴度,PCR法检测转染细胞中的TK基因.将获得的重组逆转录病毒感染人肺癌细胞株A549、肝癌细胞株SMMC-7721、宫颈癌细胞株HeLa和正常人成纤维细胞系WI-38,C418筛选阳性克隆,MTT法检测重组逆转录病毒对肿瘤细胞的生长抑制作用,流式细胞仪检测肿瘤细胞的凋亡.结果 重组逆转录病毒载体pLNC-hTERTp-TK经双酶切,可见1402 bp的目的 基因片段,表明质粒构建正确.从转染的PT67细胞中扩增出1131 bp的基因片段,与TK基因大小一致.在成功转染重组逆转录病毒的PT67细胞中,病毒滴度最高者可达7.8×105 CFU/ml.重组逆转录病毒感染的3种肿瘤细胞的增殖均受到抑制,且生长抑制率随着GCV浓度的增加而升高,经较低浓度GCV(10μg/ml)处理的3种肿瘤细胞,凋亡率分别可达37.06%、34.88%和33.59%.结论 由hTERT启动子调控的逆转录病毒介导的HSV-TK/GCV自杀基因系统可诱导肿瘤细胞凋亡,且具有较强的特异性和高效性.

关键词：人端粒酶催化亚单位核心启动子、胸苷激酶、逆转录病毒、肿瘤、细胞凋亡

所属期刊栏目：21

分类号：Q78(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家自然科学基金30471284

在线出版日期：2008-11-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：741-745