大容量人源天然噬菌体抗体库的构建

摘要：

目的 构建大容量(＞108)的人源天然噬菌体抗体库.方法 提取人外周血淋巴细胞mRNA,反转录出cDNA第一链,以此为模板,PCR扩增重链(VH)和轻链(VL)基因片段.将VL基因PCR产物插入含Loxp和Loxp511序列的pDF载体中,电转化大肠杆菌XL1-Blue,构建轻链库,再将VH基因PCR产物插入轻链库载体中,电转化大肠杆菌XL1-Blue,构建初级库.进一步用初级库超感染BS1365菌,使其VH与VL发生重组,获得重组库,再利用重组库感染大肠杆菌XLI-Blue,构建工作库.结果 所有VH和VL亚类基因的扩增产物片段大小均与理论值相符,轻重链基因的克隆效率均为100%.初级库容量为108,滴度为6×1013;重组后的工作库有效容量为8×1010滴度至少为1×1013.结论 已构建容量为1010的人源天然噬菌体抗体库.

关键词：嗜菌体、抗体库、Fab抗体

所属期刊栏目：21

分类号：Q78(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家自然科学基金资助项目30571416

在线出版日期：2008-09-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：647-650