10.3969/j.issn.1004-5503.2008.06.012
重组人B7-H4IgV融合蛋白的表达、纯化及活性
目的 表达、纯化重组人B7-H4IgV融合蛋白,并检测其活性.方法 将人B7-H4胞外片段IgV区基因插入pQE-30原核表达载体,转化大肠杆菌,IPTG诱导表达.表达产物经Ni2+-NTA柱亲和层析纯化,并进行Western blot鉴定.用纯化的rhB7-H4IgV蛋白免疫昆明小鼠,经ELISA、流式细胞术测定小鼠抗血清的活性;免疫SP2/0荷瘤小鼠,观察对肿瘤细胞生长的抑制作用.结果 表达的rhB7-H4IgV蛋白约占菌体总蛋白的25%,纯化后蛋白纯度为93%,浓度约为0.5 mg/ml,与抗His单抗可产生特异性反应条带.免疫昆明小鼠产生的抗血清效价可达1:10 000,可与SP2/0肿瘤细胞结合.rhB7-H4IgV蛋白对SP2/0移植瘤生长具有一定的抑制作用.结论 已成功表达并纯化了重组人B7-H4IgV融合蛋白,纯化蛋白可诱发小鼠体内免疫应答,产生的抗体能与表达B7-H4的肿瘤细胞SP2/0结合,rhB7-H4IgV蛋白在一定程度上能抑制SP2/0移植瘤的生长.
B7-H4IgV融合蛋白、原核表达、活性、肿瘤、免疫治疗
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Q782;R392-33(基因工程(遗传工程))
2008-08-13(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
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