RTA和RTA-KEEL/KDEL基因的表达及细胞毒性

摘要：

目的 构建蓖麻毒素A链(RTA)和RTA-KEEL/KDEL基因表达载体,并检测重组蛋白的细胞毒性作用.方法 用PeR法从蓖麻毒素基因组中扩增出RTA及RTA-KEEL/KDEL基因,连接T载体,测序正确后,定向插入质粒pET-28a(+)中,构建重组表达质粒pET-28a-RTA和pET-28a-RTA-KEEL/KDEL,转化感受态E. coli BL21(DE3),IPTG诱导表达,并对表达产物进行鉴定.结果 所表达的RTA及RTA-KEEL/KDEL非融合蛋白经SDS-PAGE分析,相对分子质量约为31 000,Westernblot分析具有反应原性,MTS法检测,RTA-KEEL/KDEL对CHO细胞具有比RTA更强的杀伤作用.结论 已成功构建RTA和RTA-KEEL/KDEL表达载体,表达的重组蛋白具有生物学活性.

关键词：蓖麻毒素A链、非融合蛋白、原核表达、细胞毒性

所属期刊栏目：21

分类号：Q782(基因工程（遗传工程）)

在线出版日期：2008-08-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：475-478