颗粒裂解肽G13结构域的表达及其对大肠杆菌活力的影响

摘要：

目的 构建携带颗粒裂解肽G13结构域的原核表达质粒,在大肠杆菌BL21(DE3)中表达目的 蛋白,并检测其对大肠杆菌活力的影响.方法 人工合成G13结构域编码DNA序列,PCR扩增后,用T.A克隆法与pBAD/TOPO ThioFusion表达载体连接.通过PCR鉴定及测序筛选阳性重组质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3),经阿拉伯糖诱导表达,SDS-PAGE检测表达情况,同时监测诱导表达前后工程菌A600值的变化及菌液中的突变体.结果 工程菌经诱导,表达出相对分子质量约15 000的特异蛋白,表达量占菌体总蛋白的3%左右.随着外源蛋白的表达,菌液A600值下降,随后又缓慢上升.提取的质粒测序结果 表明,其启动子的-35区和-10区均发生了突变,随着诱导时间的增加,突变细胞的比例不断增加.结论 已成功构建了G13结构域原核表达质粒,并在大肠杆菌中表达出G13融合蛋白.该异源蛋白的表达导致丁程菌的活力降低.

关键词：颗粒裂解肽、G13结构域、原核表达、大肠杆菌、活力

所属期刊栏目：21

分类号：Q786(基因工程（遗传工程）)

资助基金：安徽省高校省级自然科学研究重点项目KJ2007A091;安徽大学211工程学术创新团队资助02203109;安徽大学研究生创新项目20073046

在线出版日期：2008-08-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：467-470